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固相萃取技術(shù)時(shí)操作步驟
更新時(shí)間:2018-04-25   點(diǎn)擊次數(shù):3268次

 

  1. 盡量慢

    我們?cè)谟霉滔噍腿r(shí),面臨的一個(gè)問題就是:液體應(yīng)該以什么速率過柱流出,我的經(jīng)驗(yàn)是,要想效果好,就要慢,盡量慢。

  對(duì)于固相萃取柱中的填料,我們?nèi)绻植糠糯蟮乜?,能夠看到其?shí)它們是有很多的空隙,液體流通的渠道很多,如果流得快,相當(dāng)比例的待測組分還來不及與填料充分作用就地從通道流失;所以要慢,給它們一個(gè)充分作用的機(jī)會(huì)。

  如何慢呢?一個(gè)竅門就是不要用配合抽氣機(jī)使用的所謂固相萃取器,而采用再普通不過的重力法。利用重力的作用使液體向下流出。在實(shí)驗(yàn)速度上,重力法遠(yuǎn)不如吸力法,但是在實(shí)驗(yàn)效果方面,重力法遠(yuǎn)比吸力法優(yōu)勝,用吸力法只能得到譜帶吸附,用重力法卻能得到柱頭吸附,在速度和效果兩者的平衡中,我們還是傾向于優(yōu)先保證好的效果。

  舉例來說,一個(gè)3 ml 500mg的C18小柱,如果加甲醇活化,其甲醇全部流至篩板時(shí)間約為20分鐘,而在過樣品液時(shí),25ml的液體zui多2 小時(shí)可以流完,而且用重力法如果得當(dāng),工作速率不一定比吸力法差很多。因?yàn)槲覀兛梢猿浞掷每臻e時(shí)間,用吸力法必須有人在旁邊守候,而重力法由于不需要用電,可以充分利用午休和晚上時(shí)間過柱,液體量大時(shí)接個(gè)堆疊接頭和延長管即可,安排好實(shí)驗(yàn)步驟,工作效率一樣很高。另外,重力法不需要抽氣機(jī)和固相萃取器。

  2. 盡量少

  在固相萃取條件選擇上,有人為了提高提取效率,盡量多加液體,或選擇填料量大的小柱,我覺得大可不必如此。尤其在用重力法時(shí),由于效率高,很多情況下是柱頭吸附,并不是所有的填料都在起作用,填料多了不僅液體流出速度會(huì)更慢,而且在洗脫時(shí)的擴(kuò)散會(huì)很明顯。

  因此建議,夠用就行,在能保證效率時(shí),填料盡量少,加液也不宜多。

  3. 實(shí)驗(yàn)條件不宜過分細(xì)化

  固相萃取從原理上是色譜分離,但是在操作時(shí)只把它作為吸附萃取劑使用,由于填料性質(zhì)、松緊常有差異,因此在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中不必因?yàn)樽非笮Ч?化而設(shè)計(jì)出很復(fù)雜的洗脫程序。

  在建立條件中,我們應(yīng)該盡量多利用現(xiàn)成的資料,盡快地建立起體系,同時(shí)要對(duì)操作過于復(fù)雜的步驟保持警惕性,在實(shí)驗(yàn)效果,實(shí)驗(yàn)速率和易操作性三者中取得平衡點(diǎn)。

  4. 只用一次

  固相萃取柱只用一次。因?yàn)閺膰?yán)格的意義上來說,很多物質(zhì)的吸附是不可逆的,一次吸附,無法洗脫,影響著下一次吸附,雖然有人做過重復(fù)利用的實(shí)驗(yàn),但是總體來說為了節(jié)省一點(diǎn)經(jīng)費(fèi)而大大增加了結(jié)果的不可靠性和不確定性,是很不合算的行為。

  因此建議,只用一次。如果想節(jié)省經(jīng)費(fèi)可以從減少填料量和使用小容積管入手,盡量用堆疊接頭和延長管。

  5. 慎用固相萃取器

  所有的供應(yīng)商都會(huì)在推薦固相萃取柱的同時(shí),也會(huì)推薦固相萃取器,zui簡單的固相萃取器也要幾千,如果貼個(gè)進(jìn)口商標(biāo)價(jià)格更要加幾倍,這樣的價(jià)格還不包括抽氣機(jī)。但是這樣的配置就是再加上調(diào)速開關(guān),也很難得到好的結(jié)果,主要問題就是把小柱的不平行性放大了。

  建議:實(shí)在不適合重力法的才用固相萃取器。

  至于全自動(dòng)固相萃取器,應(yīng)該說,現(xiàn)在市面上還沒有比較理想、適合食品檢測的機(jī)器,主要問題就是無法解決一批小柱中液面下降不一致的問題,加上價(jià)格很昂貴,性價(jià)比也自然不高。帶液面測量的也不能對(duì)多批量的小柱同時(shí)檢測,且有交叉污染的危險(xiǎn)。

  目前的全自動(dòng)固相萃取器基本上是走重力法路線,倒是回避了密封的難題。

  6. 不可忽視傳統(tǒng)的液體萃取

  有些人在初次接觸固相萃取時(shí),總覺得它能取代液體萃取,實(shí)際上就象毛細(xì)管電泳無法取代液相色譜一樣。固相萃取在某些場合比液體萃取合適,但是在更多情況下,還是傳統(tǒng)的液體萃取更可靠更合適。這一點(diǎn)從目前實(shí)驗(yàn)技術(shù)的實(shí)際發(fā)展可以得到印證。

  關(guān)于液固萃取,我們不要僅僅把它看作是一個(gè)提取過程,從另一個(gè)角度來看,它還是一個(gè)凈化過程,是把固形干擾物排除凈化的過程。理解這一點(diǎn),有助于我們優(yōu)化選擇實(shí)驗(yàn)方法。

  7. 實(shí)用性是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)成功與否的zui終準(zhǔn)繩

  在設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí),開始要考慮到其技術(shù)上是否*。而在實(shí)際運(yùn)用中,zui終決定這個(gè)方法是否可行,是否能夠存在的關(guān)鍵是實(shí)用性。一個(gè)實(shí)驗(yàn)方法不僅要解決問題,而且能夠在人力,物力,財(cái)力三方面達(dá)到平衡,且滿足可持續(xù)、可重復(fù)操作的要求。

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